片球菌素pedA基因的原核表达、纯化及 生物信息学分析

• 作者: 汪立平 王正全 邵会娟 陆克文 黄宇良
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: pedA基因 片球菌素PA-1 原核表达 抑菌活性 生物信息学
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 144-150
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0373

摘要

旨在构建片球菌素PA-1结构基因pedA的原核表达载体,在大肠杆菌体系中实现PA-1的外源表达,运用生物信息学手段分析重组蛋白的理化性质及分子结构.以戊糖片球菌C-2-1的DNA为模板,扩增pedA基因,扩增产物克隆入pET28a(+)原核表达载体,构建pET28a-pedA重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3)中;30℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达5 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,检测纯化后重组蛋白的抑菌活性;利用生物信息学手段探究重组蛋白的理化性质及分子结构信息.结果显示,pET28a-pedA重组质粒构建成功,带有His标签的PA-1重组片球菌素在大肠杆菌中实现了可溶性表达,利用Ni-NTA亲和层析获得纯化的重组蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的重组蛋白分子量约为7.8 kD,与理论值相符.琼脂扩散法抑菌活性实验抑菌圈效果明显,表明纯化的重组片球菌素具有抑菌活性.生物信息学方法对比分析其蛋白结构发现,获得的重组蛋白含有信号肽,α 螺旋占23.53%,疏水性提高,可能促进了重组蛋白的可溶性表达.该实验成功构建了片球菌素PA-1的原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的可溶性表达,该表达可能与其含有信号肽及信号肽疏水性有关,纯化后的重组蛋白抑菌活性明显.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宇良	上海海洋大学食品学院食品热加工工程技术研究中心	2	5	1.0	2.0
2	汪立平	上海海洋大学食品学院食品热加工工程技术研究中心	35	392	12.0	18.0
6	陆克文		15	21	3.0	4.0
7	邵会娟		1	4	1.0	1.0
8	王正全	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	4	1.0	2.0