miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向调控作用

• 作者: 余丹纯 孙小娟 聂玉强 黄耀星
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胃癌 双荧光素酶报告基因系统 逆转录聚合酶链反应 蛋白质印迹法 miR-9 活化白细胞黏附分子
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 48-51
• 页数: 4页
• 分类号: R735.2
• 字数: 3507字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2019.01.012

摘要

目的 探讨miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM)基因表达的靶向调控作用.方法 运用生物信息学方法预测靶向调控ALCAM的miRNA;应用SYBR Green荧光定量PCR检测各个人胃癌细胞株中ALCAM mRNA的表达情况,确定实验细胞株;通过PCR扩增合成含有miR-9结合位点的ALCAM mRNA 3'端非编码区(ALCAM 3'UTR)片段和在miR-9结合位点进行突变的ALCAM-mut mRNA 3'UTR,测序鉴定后将其克隆至报告基因载体psiCHECK-2质粒,分别命名为psiCHECK-2-ALCAM和psiCHECK-2-ALCAM-mut;分组转染重组质粒和miRNA,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达,SYBR Green荧光定量PCR和Western blotting检测ALCAM mRNA及蛋白表达水平.结果 生物信息学分析筛选发现miR-9可能靶向调控ALCAM;ALCAM mRNA在各胃癌细胞株中的表达量明显高于人正常胃黏膜GES-1细胞株,且SGC-7901细胞株ALCAM mRNA的表达量最高(P＜0.05),确定为实验细胞株;测序验证ALCAM 3'UTR和ALCAM-mut3'UTR经PCR扩增合成成功;psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-9 mimics细胞组的相对荧光素酶活性较psiCHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-NC、miR-9 inhibitor细胞组或空白对照组明显降低(P＜0.05),且该组细胞ALCAM mRNA和蛋白的表达明显降低(P＜0.05);而psiCHECK-2-ALCAM-mut质粒共转染miR-NC、miR-9 mimics或miR-9 inhibitor细胞组的相对荧光素酶活性与空白对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在SGC-7901中,miR-9通过与ALCAM mRNA 3'UTR结合而负性调控ALCAM基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂玉强	广州市第一人民医院消化内科	130	1397	15.0	33.0
2	余丹纯	广州市第一人民医院消化内科	8	11	1.0	3.0
3	黄耀星	广州市第一人民医院消化内科	22	70	5.0	8.0
4	孙小娟	广州市第一人民医院消化内科	8	10	2.0	3.0