从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达

• 作者: 张升波 张喜懿 徐丽 李昌红 杨佰启 温贵兰 田浪 陈广
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 从江香猪源干扰素γ 植物表达载体 生菜 瞬时表达 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 96-100
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2019-07-096

摘要

为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达.参考GenBank登录的猪IFNγ 基因序列设计1对特异性IFNγ 引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ 基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ 蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ 蛋白抗病毒活性.结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ 基因序列并构建了从江香猪源IFNγ 植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ 蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ 经4-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用.本实验成功构建从江香猪源IFNγ 植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ 药用植物蛋白的研究开发提供参考依据.