KSHV K15P及其突变体的慢病毒包装与稳定细胞株的筛选及其对内皮细胞增殖迁移的影响

• 作者: 周畅 文志 方圆 林康 王林定 许常青 许方玮 陈伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P K15P (YF) 慢病毒 EA.hy926
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1765-1770
• 页数: 6页
• 分类号: R394.3|R373.9
• 字数: 4626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.11.021

摘要

目的 包装包含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K15P及其突变体K15P(YF)基因的慢病毒颗粒,并对此基因在EA.hy926细胞内稳定表达进行研究.方法 通过PCR方法扩增获得KSHV K15P、K15P(YF)基因片段,使用限制性内切酶Not Ⅰ与BamH Ⅰ酶切和TA克隆法构建T载体与慢病毒表达载体pHAGE-CMV-MCS-K15P-Puro、pHAGE-CMV-MCS-K15P(YF)-Puro,通过lip2000将构建好的慢病毒表达载体与两种辅助包装质粒PSPAX2和pMD2.g共转染HEK 293T细胞,48 h后收集慢病毒.慢病毒感染EA.hy926细胞并通过嘌呤霉素筛选稳定表达株,Western blot检测K15P与K15P(YF)蛋白的表达.Transwell与CCK8实验检测K15P对内皮细胞的增殖迁移影响.结果 成功构建慢病毒表达载体,筛选出稳定表达K15P、K15P(YF)蛋白的EA.hy926细胞.在EA.hy926细胞Transwell迁移实验中,与空载体组和K15P突变体组(0.98±0.23)比较,K15P组(2.25±0.15)的EA.hy926细胞的迁移能力明显增强(P＜0.01),三组细胞迁移量差异有统计学意义(F=113.5,P＜0.01);CCK8增殖活性实验中,与空载体组和K15P(YF)组(109.23±12.58)比较,K15P组(138.69±7.47)的EA.hy926细胞的增殖能力明显增强(P＜0.01),三组细胞增殖活性差异有统计学意义(F =40.78,P＜0.01).结论 K15P蛋白增强了内皮细胞的增殖与迁移,而K15P(YF)突变体的促进细胞增殖迁移能力减弱,提示K15P蛋白可能在KS的发生发展中参与重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	安徽医科大学微生物学教研室	48	201	9.0	11.0
2	王林定	安徽医科大学微生物学教研室	11	17	3.0	4.0
3	周畅	安徽医科大学微生物学教研室	2	5	1.0	2.0
4	许常青	安徽医科大学微生物学教研室	4	5	1.0	2.0
5	许方玮	国际关系学院英语系	1	0	0.0	0.0
6	方圆	安徽医科大学微生物学教研室	4	5	1.0	2.0
7	文志	安徽医科大学微生物学教研室	1	0	0.0	0.0
8	林康	安徽医科大学微生物学教研室	1	0	0.0	0.0