KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定

• 作者: 方圆 汪小五 王林定 许常青 陈伟
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P基因 慢病毒
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1417-1420
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3|R373.9
• 字数: 3350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.005

摘要

目的 构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV) ORFK15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究.方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe Ⅰ酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体pCDH-CMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒pMDL-PRRE、pRSV-Rev和pMD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Westem blot法检测K15P蛋白的表达.结果 经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106 TU/ml滴度为慢病毒.结论 成功构建了KSHVK15P慢病毒表达载体pCDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈伟	安徽医科大学微生物学教研室	48	201	9.0	11.0
2	王林定	安徽医科大学微生物学教研室	11	17	3.0	4.0
3	汪小五	安徽医科大学微生物学教研室	7	15	3.0	3.0
4	许常青	安徽医科大学微生物学教研室	4	5	1.0	2.0
6	方圆	安徽医科大学微生物学教研室	4	5	1.0	2.0