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摘要:
目的 构建含卡波肉瘤相关疱疹病毒(KSHV) ORFK15P基因的慢病毒载体,并对其在293T细胞内的表达进行研究.方法 PCR法扩增获得KSHV K15P基因,限制性内切酶Nhe Ⅰ酶切和无缝克隆法构建重组慢病毒载体pCDH-CMV-K15P-GFP,通过脂质体转染试剂将重组慢病毒载体与3种辅助质粒pMDL-PRRE、pRSV-Rev和pMD2.g共转染HEK 293T细胞包装产生慢病毒,Westem blot法检测K15P蛋白的表达.结果 经酶切及测序鉴定,成功构建慢病毒载体,重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293T细胞可见有荧光表达,说明K15P基因在细胞内有表达并且96 h后产生4×106 TU/ml滴度为慢病毒.结论 成功构建了KSHVK15P慢病毒表达载体pCDH-CMV-K15P-GFP,获得高效表达K15P基因的慢病毒颗粒,为后续其在细胞内的功能研究奠定实验基础.
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文献信息
篇名 KSHV K15P慢病毒载体的构建及其滴度测定
来源期刊 安徽医科大学学报 学科 医学
关键词 卡波肉瘤相关疱疹病毒 K15P基因 慢病毒
年,卷(期) 2016,(10) 所属期刊栏目 基础医学研究
研究方向 页码范围 1417-1420
页数 4页 分类号 R394.3|R373.9
字数 3350字 语种 中文
DOI 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.10.005
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 陈伟 安徽医科大学微生物学教研室 48 201 9.0 11.0
2 王林定 安徽医科大学微生物学教研室 11 17 3.0 4.0
3 汪小五 安徽医科大学微生物学教研室 7 15 3.0 3.0
4 许常青 安徽医科大学微生物学教研室 4 5 1.0 2.0
6 方圆 安徽医科大学微生物学教研室 4 5 1.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
卡波肉瘤相关疱疹病毒
K15P基因
慢病毒
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
安徽医科大学学报
月刊
1000-1492
34-1065/R
大16开
合肥市梅山路安徽医科大学校内
26-36
1955
chi
出版文献量(篇)
7450
总下载数(次)
15
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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