冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定

• 作者: 孟宇 李士泽 李昌盛 李玉恒 李静辉 杨焕民
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 冷诱导RNA结合蛋白 过表达 慢病毒
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧生物技术
• 页码范围: 77-80
• 页数: 4页
• 分类号: Q494|Q78
• 字数: 3347字
• 语种: 中文

摘要

构建冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究CIRP功能提供基础工具.本研究从4℃冷处理8h的SD大鼠睾丸组织中获得CIRP的cDNA序列测序后,将其克隆入LV5质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组LV5-cirp表达载体与pGag/Pol、pRev、pVSV-G3个质粒共转染到HEK-293T细胞,72 h收获上清,包装产生慢病毒.将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,以及采用Western blot方法验证基因表达情况.结果表明:经琼脂糖凝胶电泳鉴定、PCR鉴定、酶切及测序结果证明成功构建了LV5-cirp重组质粒,序列比对与设计序列符合率100％,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为6.30×108TU/mL;将制备成功的CIRP慢病毒过表达载体感染293T细胞后,Western blot检测结果显示细胞中CIRP蛋白表达水平显著高于正常细胞以及慢病毒阴性对照组(P＜0.01).本实验成功构建CIRP慢病毒过表达载体并完成了慢病毒包装及滴度的测定,为今后的研究提供了基础工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨焕民	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	194	1084	14.0	23.0
2	李士泽	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	108	631	14.0	22.0
6	孟宇	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	9	17	2.0	3.0
7	李玉恒	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	6	13	2.0	3.0
8	李昌盛	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	23	43	4.0	5.0
9	李静辉	黑龙江八一农垦大学动物科技学院	8	13	2.0	3.0