猪伪狂犬病病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 刘青芸 华琳 吴斌 周宁 国师榜 陈焕春
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 gE基因 TaqMan实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1667-1673
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.03

摘要

针对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gE基因保守区的核苷酸序列设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立并优化了一种可快速、定量检测PRV野毒的TaqMan实时荧光定量PCR方法.应用该方法检测猪常见病毒性病原(猪瘟病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型),PRV gE基因缺失株,以及健康猪的组织,结果均为阴性,证明该方法特异性良好.该检测方法能够检到的阳性质粒模板最低浓度为254 copies/μL,最低病毒浓度为4.22 TCID50/100μL,比常规PCR敏感性高10倍;重复性试验结果表明该方法重复性良好;用TaqMan实时荧光定量PCR方法和常规PCR方法同时检测37份临床样品,其中前者检出阳性病料22份,阳性检出率为59.64％,后者检出阳性病料15份,阳性检出率为40.54％,2种方法的符合率为81.08％.综上所述,该方法的建立为PRV的实验室诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段.