Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定

• 作者: 孙筱品 宋晓明 宋杨 杨怡 杨磊 桂飞 汪朦 汪海燕 洪玉 董玉梅 谌容 谭晓华 黄瑾
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: Neuritin 载体构建 基因打靶 胚胎干细胞
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 16-21
• 页数: 6页
• 分类号: Q954|Q785
• 字数: 3943字
• 语种: 中文

摘要

Neuritin(Nrn1)是神经营养因子家族的成员,能够维持神经元的存活和突起的生长,在神经系统发育和再生中起重要作用.为了解Neuritin基因在整体动物水平的系统生物学功能,通过PCR扩增Neuritin基因片段,将该片段用In-fusion无缝克隆技术连接至用限制性内切酶A sc1酶切后线性化的CTV-IRES-EGFP质粒,转化至Stellar感受态细胞后,对酶切和测序鉴定正确的阳性克隆子进行大量提取质粒,酶切使之线性化后将其电转导入小鼠胚胎干细胞细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,用PCR方法鉴定出同源重组的ES细胞DNA.结果表明,成功构建了CTV-Nrn1-IRES-EGFP基因打靶载体载体并筛选出阳性同源重组胚胎干细胞,为制备Neuritin条件性基因打靶小鼠模型奠定了实验基础.