毛白杨木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35原核可溶性表达方法研究

• 作者: 李爽 李钰华 盖颖
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 毛白杨 木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶 原核表达 包涵体 可溶性蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 33-36
• 页数: 4页
• 分类号: S792.117.01
• 字数: 2554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.08.007

摘要

从毛白杨中克隆得到木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶PtoXTH35基因,根据SignalIP在线软件预测蛋白信号肽,并分别构建至pET28a、pET32a、pGEX-4t-1、pMAL-c5e、pET 43.1a等5种原核表达载体,经双酶切和测序验证后转化至BL21(DE3)感受态,使用终浓度为0.4 mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导其表达目的蛋白.经SDS-PAGE检测,结果表明5种载体均可表达目的蛋白,pET28a、pET32a、pGEX-4t-1等3种载体所表达蛋白均以包涵体的形式存在,而pMAL-c5e和pET 43.1a载体携带蛋白表达量高并且所表达蛋白50％ 为可溶性蛋白,实现了毛白杨PtoXTH35在原核表达系统中的高效可溶性表达,该试验为后续进一步研究毛白杨PtoXTH35的体外功能奠定了基础.