利用Cre/loxP系统构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型

• 作者: 叶艳诗 沈洁 王肖 白晓春 许雪娟 赖舒畅
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病 PDHA1 Cre/loxP β细胞 基因
• 年，卷（期）: 2019,（31）
• 所属期刊栏目: 组织构建实验造模
• 页码范围: 5023-5029
• 页数: 7页
• 分类号: R446|R496|R318
• 字数: 7845字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1985

摘要

背景:研究表明,2型糖尿病啮齿类动物模型及人体的丙酮酸脱氢酶复合体表达量降低,PDHA1基因缺陷也是导致丙酮酸脱氢酶复合体酶活性改变最常见的原因.目的:构建并鉴定胰岛 β 细胞特异性敲除PDHA1基因小鼠,为后续探究PDHA1基因在糖尿病发病机制方面作用提供模型基础.方法:实验方案经南方医科大学伦理委员会批准.利用Cre/loxP系统理论,将PDHA1loxp/loxp小鼠与胰岛 β 细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠进行数代杂交,3-4周龄小鼠通过PCR法鉴定筛选基因型,子2代中基因型为PDHA1loxp/loxpCre+/-小鼠即为实验所需要构建的模型小鼠.取4周龄PDHA1flox/floxCre+/-小鼠(βKO小鼠组)与Cre+/-小鼠(对照组)各5只,给予相同的水和饲料,待8周龄时连续7 d注射腹腔注射他莫昔芬50 mg/kg诱导PDHA1基因敲除,观察3周后腹腔注射麻醉,取胰腺组织、脂肪组织、肝脏组织.采用qPCR法、Western Blot法、免疫组织化学法鉴定PDHA1基因敲除效果,观察小鼠表型.结果与结论:①PCR基因扩增筛选出基因型为PDHA1loxp/loxpCre+/-小鼠;②qPCR法检验小鼠胰腺、脂肪、肝脏组织,证实敲除效果具有组织特异性,胰岛中 βKO组小鼠PDHA1 mRNA的相对表达较对照组明显下降;③Western Blot检测及免疫组织化学法观察显示,βKO组小鼠PDHA1蛋白表达较对照组小鼠明显降低,证实敲除PDHA1基因效果明显;④结果说明,利用Cre/loxP系统成功构建胰岛β细胞特异性敲除PDHA1基因的小鼠模型,为动物水平上探究糖尿病发病机制提供新的靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈洁	南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科	128	654	12.0	20.0
2	白晓春	南方医科大学第三附属医院中心实验室	20	65	5.0	7.0
3	王肖	南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科	6	15	2.0	3.0
4	赖舒畅	南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科	3	2	1.0	1.0
5	叶艳诗	南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科	1	0	0.0	0.0
6	许雪娟	南方医科大学第三附属医院内分泌与代谢科	1	0	0.0	0.0