基于Loxp-Cre系统的去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠模型的构建

• 作者: 刘雯 张令强 秦书霞
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 泛素 Loxp-Cre OTUD4 小鼠,基因敲除 聚合酶链反应 基因型
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 721-726
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.10.001

摘要

目的 应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠.方法 利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个LoxP位点分别设在E4的两端,经打靶载体转入ES细胞、阳性克隆筛选、囊胚注射等过程,得到嵌合体小鼠,再将嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠交配繁育,最终得到杂合子小鼠并进行自交得到新生F1代小鼠.然后利用PCR进行基因型鉴定,使用免疫印迹(WB)技术从蛋白水平检测OTUD4在各组织器官中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功.对各基因型小鼠进行数量统计分析明确其是否符合孟德尔遗传定律,是否具有胚胎致死表型.解剖小鼠观察主要组织器官有无明显发育异常,利用HE染色观察是否具有自发的病理改变.通过葡萄糖耐受实验分析基因敲除小鼠是否具有代谢异常等.结果 基因型鉴定和WB检测结果显示Otud4基因敲除小鼠模型成功建立.杂合子小鼠自交后各基因型比例符合孟德尔定律,提示Otud4基因敲除小鼠非胚胎致死.各组织器官大小无显著性差异,HE染色并无异常,且Otud4基因敲除后不影响小鼠的血糖稳态.结论 应用Loxp-Cre系统成功构建了Otud4基因敲除小鼠,且小鼠正常出生,无任何胚胎发育缺陷,各器官无显著病理性变化,血糖代谢无异常.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦书霞	安徽医科大学研究生院	1	0	0.0	0.0
10	刘雯	军事科学院军事医学研究院生命组学研究所	1	0	0.0	0.0
11	张令强	安徽医科大学研究生院	7	2	1.0	1.0