结核杆菌表面ManLAM诱导人Ⅱ型肺泡 上皮细胞中IL-37表达的研究

• 作者: 吴雨梅 方宏才 李娜 武红梅 谢振东 陈思达 黄震
• 来源期刊: 医学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 结核杆菌 甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖 白细胞介素-37 磷酸化
• 年，卷（期）: 2019,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 2146-2150
• 页数: 5页
• 分类号: R252
• 字数: 3964字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19381/j.issn.1001-7585.2019.14.003

摘要

目的:使用A549细胞系来探究ManLAM对人Ⅱ型肺泡上皮细胞中IL-37产生的可能作用以及相关分子机制.方法:通过从H37RV结核杆菌中提取并纯化ManLAM,将纯化的ManLAM用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染分析.使用TRIzol法提取人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞中的总RNA.用逆转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA.使用单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(Santa Cruz Biotechnology)对A549细胞中表达出来的IL-37进行检测.使用MAPK抗体试剂盒(Cell Signaling Technology)通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)对磷酸化的和总的p38和ERK1/2 MAPKs进行检测.针对TLR2或TLR4的siRNA或者抑制性siRNA,每5×105个A549细胞转染60pmol siRNA;ELISA法和流式细胞术检测A549细胞中表达出来的IL-37水平,用以评估ManLAM诱导A549细胞中IL-37表达的能力以及观察p38和ERK1/2等抑制剂对ManLAM诱导产生的IL-37表达的影响.结果:由于Man-LAM是水相的主要成分,笔者发现ManLAM诱导IL-37 mRNA及蛋白表达具有时间和剂量依赖性,然而这种活性几乎可以全部被ERK1/2(U0126)和p38(SB203580)抑制剂所消除.在A549细胞中,ManLAM刺激主要是诱导ERK1/2和p38磷酸化以及细胞表面TLR2的表达.TLR2表达受到干扰后,ERK1/2和p38磷酸化水平也显著下降,同时IL-37的产物也大大减少.虽然ManLAM也能促进A549细胞中TLR4的表达,但是干扰TLR4对ManLAM诱导IL-37的表达没有影响.结论:ManLAM通过上调TLR2/p38或ERK1/2信号通路来诱导人Ⅱ型肺泡上皮细胞中IL-37的产生,而且,这为解释ManLAM促进结核杆菌持久性的病理学作用提供了一个重要的依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢振东		6	8	1.0	2.0
2	李娜		14	95	4.0	9.0
3	黄震		15	40	4.0	5.0
4	吴雨梅		7	11	2.0	3.0
5	武红梅		6	7	2.0	2.0
6	方宏才	江西省九江学院附属医院	3	5	1.0	2.0
7	陈思达		2	0	0.0	0.0