青稞AFLP体系的建立及优化

• 作者: 刘小娇 张文会 张玉红 朱明霞 王姗姗 王波 白婷 靳玉龙
• 来源期刊: 现代农业科技
• 学科: 农学
• 关键词: 青稞 AFLP PCR体系优化 引物筛选
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 农艺学
• 页码范围: 3-6
• 页数: 4页
• 分类号: S512.3
• 字数: 4670字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5739.2019.05.002

摘要

本文以青稞为材料,对AFLP酶切连接、预扩增、选择性扩增过程进行优化.结果表明,酶切反应条件为DNA模板200 ng、限制性内切酶EcoRI/MseI 4U、酶切时间4 h;连接反应条件为连接温度16℃,T4连接酶3 U,连接时间12 h以上;预扩增反应条件为rTaq聚合酶3 U、dNTP 4 mmol/L、镁离子浓度1.00 mmol/L;选择性扩增反应条件为rTaq聚合酶4 U、dNTP 4 mmol/L、镁离子浓度1.25 mmol/L及预扩产物稀释10倍.利用优化后的AFLP体系,以藏青2000、冬青18这2个供试材料的基因组为模板,从100对引物组合中筛选出10对重复性好、稳定性强、扩增条带清晰、分布均匀、多态性高的引物组合,为青稞种质资源鉴定及遗传多样性分析提供了基础.