小鼠CTLA4-Fc融合基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 何志惠 刘思汝 林岷格 谢盼盼 黄用豪
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 Fc融合蛋白 真核表达质粒
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 473-476
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|R73
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2020.05.17

摘要

目的 构建小鼠细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4Fc融合基因(CTLA4-Fc)的真核表达质粒,并检测其在293T细胞中的表达,为后续在小鼠体内研究CTLA4-Fc抗肿瘤作用机制奠定基础.方法 Gene Runner软件设计并合成互为搭桥、互为模板的CTLA4融合基因引物,利用重叠PCR方法扩增获得CTLA4基因片段,与pcDNA3.1(+)/Fc (MouseIgG2a)质粒同时进行双酶切,连接合成CTLA4-Fc融合基因表达质粒;菌落PCR扩增、双酶切以及测序鉴定后,在293T细胞中瞬时转染表达融合基因的质粒,ELISA法检测其在293T细胞内的蛋白表达含量.结果 成功构建CTLA4-Fc融合基因.经菌落PCR和双酶切,琼脂糖电泳检测到CTLA4-Fc片段长度为1 200 bp,CTLA4片段长度为568 bp DNA.将阳性重组克隆菌落挑于液体LB培养基中扩大培养并将菌液送公司测序,测序结果证实DNA序列与GenBank同源性为100％.通过ELISA方法能够检测到CTLA4-Fc质粒在293T细胞中的表达.结论 CTLA4-Fc融合基因正确克隆入pcDNA3.1(+)/Fc(Mouse IgG2a)质粒中,该质粒能够在293T细胞中表达.本研究利用重叠PCR技术扩增获得CTLA4基因序列,能够快速获得目的基因扩增产物,提高了实验的成功率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林岷格	海南医学院第一附属医院皮肤性病科	30	113	5.0	10.0
2	何志惠	海南医学院第一附属医院肿瘤内科	19	60	4.0	7.0
3	黄用豪	海南医学院第一附属医院肿瘤内科	25	52	3.0	6.0
4	刘思汝	海南医学院第一附属医院肿瘤内科	1	0	0.0	0.0
5	谢盼盼	海南医学院第一附属医院肿瘤内科	1	0	0.0	0.0