斑石鲷肝脏细胞系的建立与鉴定

• 作者: 张宏祥 李坤明 王娜 翟介明 陈松林
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 斑石鲷 肝脏细胞系 原代培养 核型
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 360-368
• 页数: 9页
• 分类号: S917.4
• 字数: 6490字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.02.018

摘要

鱼类细胞培养技术是一种被广泛应用于病毒学、环境毒理学、细胞生物学、基因组学以及遗传学等方面研究的重要研究手段.斑石鲷(Oplegnathus punctatus)是优良的海水养殖鱼类,在水产养殖产业中备受青睐.本研究通过组织块法,以斑石鲷肝脏组织为材料,建立了斑石鲷肝脏细胞系(O.punctatus liver cell line,OPL).培养细胞系所用的培养基是在L-15基本培养基中添加了青链霉素混合液、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和β-巯基乙醇(2-mercaptoethanol,2-ME)所配成的完全培养基.培养出的OPL细胞主要由成纤维样细胞构成,生长分裂旺盛,成功传至30多代.比较不同培养基:L-15(Leibovitz-15)、DMEM/F12(Dulbecco's modified Eagle medium/Ham's F-12)、DMEM和MEM对OPL细胞生长的影响,结果表明,L-15培养基最适用OPL的培养.此外,检测了温度、FBS浓度、bFGF浓度对OPL细胞生长的影响.结果表明,OPL细胞在18～30℃能正常生长,24℃是最适生长温度;OPL细胞在0％～20％FBS浓度范围内,其生长速度随血清浓度的升高而增快;在培养基中添加bFGF可以提高细胞生长速度.核型分析显示,第20代OPL细胞显示为正常二倍体核型(2n=2sm+46t),但其比例仅为68％.通过脂质体转染法将pEGFP-N3质粒转入OPL细胞中,可表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP).用斑石鲷的线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因进行检测,确定该OPL细胞系来源于斑石鲷.OPL细胞系的建立将为斑石鲷致病性病毒的感染机制、细胞及基因的功能分析等研究提供实验材料.