软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立

• 作者: 刘靖 叶剑敏 李扬 李炳喜
• 来源期刊: 华南师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 记忆缺失性贝毒 软骨藻酸 多克隆抗体 间接竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 生物学与生物工程
• 页码范围: 68-76
• 页数: 9页
• 分类号: S965.3
• 字数: 6691字
• 语种: 中文

摘要

软骨藻酸(Domoic Acid,DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用.DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率,通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定,成功制备偶联比为44:1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16:1的包被抗原DA-BSA;用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210000 units/mL效价的抗血清,并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件,确定各项最佳工作质量浓度及条件,最后成功绘制100 ng/mL～10 g/mL范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA,这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义,也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础.