miR-186上调Dicer1抑制结肠癌细胞侵袭转移的分子机制

• 作者: 李新建 樊明湖 毛英 王克强 罗来斌 车河龙 邱卫明 陈保华 黄荣
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: miR-186 结肠癌 Dicer1 侵袭 转移
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 177-186
• 页数: 10页
• 分类号: R34
• 语种: 中文

摘要

为探讨miR-186通过Dicer1影响结肠癌细胞侵袭转移及其作用机制,RT-qPCR检测miR-186在结肠癌组织及正常癌旁组织、人结肠癌细胞及正常人肠上皮细胞HIEC中的表达;荧光显微镜观察稳定过表达/下调miR-186细胞系GFP荧光并采用RT-qPCR检测miR-186表达效率;Transwell及划痕实验检测miR-186对结肠癌细胞SW620和HT29侵袭、迁移能力的影响;免疫荧光法检测上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子N-cadherin表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-186和Dicerl的靶向关系;免疫组织化学法检测Dicer1在结肠癌组织及正常癌旁组织中的表达;Western blotting检测Dicer1在各细胞株中的表达.结果 显示,肿瘤组织中miR-186的表达水平显著低于正常癌旁组织(P＜0.05);miR-186在肿瘤细胞中的表达水平显著低于HIEC(P＜0.05).转染过表达/下调miR-186慢病毒阳性质粒及阴性对照的SW620和HT29细胞均出现大量绿色荧光;RT-qPCR显示稳定过表达细胞SW620-mimic-miR-186中miR-186水平显著升高,HT29-inhibitor-miR-186中miR-186水平显著下降,分别与SW620和SW620-mimic-NC、HT29和HT29-inhibitor-NC相比差异有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-186能显著降低SW620的侵袭迁移能力,同时抑制N-cadherin水平,而下调miR-186能显著增加HT29的侵袭迁移能力.经www.microRNA.org网站预测发现miR-186和Dicerl有互补结合序列,双荧光素酶报告实验证实两者的靶向结合关系.SW620中Dicer1表达水平显著低于HIEC(P＜0.05);稳定过表达细胞系SW620-mimic-miR-186中Dicer1表达水平明显升高,分别与SW620和SW620-mimic-NC相比差异有统计学意义(P＜0.05).由此,miR-186通过靶向正调控Dicer1的表达降低N-cadherin水平从而抑制EMT进程,最终抑制结肠癌细胞的侵袭迁移能力.