基于退火缓冲液的SLiCE无缝克隆方法的改良

• 作者: 杨东成 王永泽 王金华 蔡松 赵筱
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: SLiCE 无缝克隆 退火缓冲液
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 214-222
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0468

摘要

旨在建立一种在采用低感受态细胞转化的条件下完成Seamless ligation cloning extract(SLiCE)无缝克隆的方法.通过在SLiCE反应中引入变性和复性步骤来提高无缝克隆的效率.结果显示,当DNA片段经过SLiCE处理后再进行变性和复性处理,其产生的克隆子比对照多7倍左右,经过菌落PCR验证SLiCE无缝克隆的重组效率高达100％,在此条件下,采用1.7×106 CFU/μg转化效率的感受态细胞转化SLiCE反应产物,不仅能够得到重组成功的克隆子,且经验证重组效率仍高达100％.采用引入变性和复性步骤的SLiCE方法,使用常用的CaCl2方法制备的普通感受态细胞,就能得到阳性克隆子,实现无缝克隆,表明本方法能提升SLiCE技术的克隆效率和实用性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王金华	湖北工业大学生物工程与食品学院	73	501	12.0	19.0
2	王永泽	湖北工业大学生物工程与食品学院	48	306	8.0	16.0
3	赵筱	湖北工业大学生物工程与食品学院	21	41	4.0	6.0
4	杨东成	湖北工业大学生物工程与食品学院	4	2	1.0	1.0
5	蔡松	湖北工业大学生物工程与食品学院	3	0	0.0	0.0