CRISPR/Cas9技术联合AAV对Rosa-mTmG小鼠的MEF细胞进行编辑

• 作者: 丁楠 杨静思 武宏春 殷为民 王勇 胡士军 赵振奥 雷伟 韩兴龙
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因编辑 CRISPR/Cas9 腺相关病毒 小鼠胚胎成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 167-175
• 页数: 9页
• 分类号: Q782
• 字数: 5737字
• 语种: 中文

摘要

目前,基因编辑技术已被广泛用于生物医学研究,本研究利用AAV(Adeno-Associated Virus)递送CRISPR/Cas9系统,实现高效率的基因编辑,并对特定组织细胞中的基因编辑进行了初步探索.我们首先采用Rosa-mTmG转基因小鼠来研究CRISPR/Cas9在小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblast,MEF)中的编辑效率;接着,我们构建了能够被AAV包装的SaCas9系统,并通过瞬转以及AAV介导递送的方式检测其基因编辑效率;最后,我们还构建了含有心肌特异启动子的cTNT-PX601-sgRNA以备后续研究.结果发现,与瞬转相比,AAV介导CMV-PX601-sgRNA在体外能够极大地提高细胞的基因编辑效率.另外,cTNT-PX601-sgRNA能够在心肌细胞中特异表达.我们的结果表明,利用AAV介导的CRISPR/Cas9系统在体外可以实现高效地基因编辑,为靶向修复基因缺陷疾病,特别是特定组织器官中的基因缺陷,提供了研究工具和实验依据.