安徽三界地区恙虫病东方体SJ2株基因重组抗原的制备及活性分析

• 作者: 高豹 吕恒 周东明 胡丹 韩一芳 蔡旭燊 陆云军 卢一辰 张锦海 熊晓辉 操敏
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 关键词: 恙虫病东方体 克隆表达 免疫分析 诊断
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 213-217
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2020.04.003

摘要

为制备恙虫病东方体SJ2株基因重组抗原和恙虫病血清学诊断备选抗原,根据恙虫病东方体56 kDa外膜蛋白基因序列设计特异性引物,经PCR扩增东方体SJ2株56 kDa型蛋白羧基端部分基因,序列测定并用软件Bioedit与我国主要东方体流行株56kDa蛋白进行氨基酸序列比对分析.然后克隆至载体pET-28a并在BL21菌体中诱导表达,通过His镍柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western-blot鉴定分析.结果显示,成功扩增出恙虫病东方体SJ2株56 kDa蛋白708 bp基因片段,氨基酸序列比对显示,该截短蛋白含2个保守区和1个可变区.经IPTG诱导表达后,蛋白电泳在27 kDa处出现明显目标条带.Western-blot结果显示,该蛋白与恙虫病病人血清有特异性免疫反应,与正常人血清不反应.结果表明,诱导表达的重组56 kDa蛋白具有良好的免疫原性,可能备选为恙虫病诊断抗原用于恙虫病血清学检测.