K亚群禽白血病病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 崔言顺 李建亮 李玉燕 李阳 王一新 王瑞明 相英杰 赵鹏 郭龙宗 都玉印
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: K亚群禽白血病病毒(ALV-K) 实时荧光定量PCR 病毒载量
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 524-529
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.13

摘要

根据K亚群禽白血病病毒(ALV-K) gp85基因序列设计1对引物,对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ALV-K的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法.该方法在1～107 copies/μL范围内具有良好的线性关系,灵敏度达到1 copies/μL,是常规PCR方法的100倍.该方法与经典亚群ALV及其他常见禽免疫抑制病病毒无交叉反应,批间与批内重复性试验变异系数均小于2％.将ALV-K原型株JS11C1通过卵黄囊接种途径感染SPF鸡,运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法,对感染鸡体内各器官的病毒分布及病毒载量进行了检测.结果 显示,在感染鸡的心脏、脾脏、肺脏、肾脏等器官中均可检测到病毒,其载量无明显差异.结果 表明,本试验所建立的实时荧光定量PCR方法具有敏感度高、特异性强和重复性好的优点,可用于ALV-K的快速、定量检测,该方法同时为ALV-K致病机制的研究提供了良好的技术手段.