断裂内含肽C片段在大肠埃希菌表达系统中酶解稳定性的改良

• 作者: 张静 曹津 朱建伟 陈俊升 陈浩
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: NpuDnaE C端剪切 蛋白质稳定性 蛋白质降解
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 340-348
• 页数: 9页
• 分类号: Q816
• 字数: 4132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20200312

摘要

断裂内含肽Npu DnaE介导的蛋白质剪接、剪切反应,可以应用于蛋白质工程领域诸多方面,但其C段重组蛋白在表达纯化过程中发生的降解,降低了重组蛋白的产率和纯度.为提高NpuC段稳定性,本研究构建了N端融合NpuN2片段的NpuC延长变体N2C.将N2C在BL21(DE3)中进行表达、用亲和色谱进行纯化,用ImageJ扫描计算表达纯化中降解情况,进而对影响内含肽C端剪切反应的各因素如温度、DTT浓度、N/C比例等进行了考察.结果表明,延长变体N2C使降解产物占比降低至2.7％～7.2％,在1 mmol/L DTT催化,N/C比例为5:1,37℃反应条件下,30 min产物生成率达90％.N2C在提升Npu DnaE内含肽C段在大肠埃希菌表达系统中表达、纯化过程的稳定性的同时,保留了其C端剪切反应的活性,对其在蛋白纯化领域应用有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张静	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	96	581	14.0	20.0
2	朱建伟	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	25	24	2.0	4.0
3	陈浩	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	43	189	8.0	12.0
4	陈俊升	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	6	6	1.0	2.0
5	曹津	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	7	1	1.0	1.0