C端断裂型内含肽Npu DnaE介导的抗体片段及免疫毒素在大肠埃希菌中的可溶性表达与纯化

• 作者: 张静 曹津 朱建伟 陈俊升 陈浩
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 免疫毒素 促溶标签 断裂内含肽
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 213-222
• 页数: 10页
• 分类号: Q78
• 字数: 5316字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11665/j.issn.1000-5048.20200213

摘要

为实现免疫毒素在大肠杆菌内的可溶性表达,避免包涵体的形成带来的繁琐操作,本实验选用抗间皮素单克隆抗体SS1,以及其与毒素PE38KDEL连接的产物SS1P为实验对象;采用促溶标签结合低温诱导方式实现重组蛋白在大肠埃希菌(SHuffle T7)胞质内可溶性表达,其中促溶标签连接在NpuCD118G突变体的N端,SS1/SS1P连接在NpuCD118G突变体的C端;采用Dextrin Beads 6FF柱亲和色谱和镍柱亲和色谱方法实现目的蛋白纯化;采用分别表达纯化后混合的方法实现断裂内含肽Npu DnaE的自我断裂;采用镍柱亲和色谱除去未剪切的前体和断裂后促溶标签,其中,SS1进一步用Capto L捕获富集;采用Fortebio检测蛋白亲和力.本实验通过内含肽与促溶标签和纯化标签连用,实现了免疫毒素在大肠埃希菌中的可溶性表达,简化了纯化方式.该方法为开发基于大肠埃希菌表达系统的可溶性表达、纯化免疫毒素类药用重组蛋白方法提供了理论参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张静	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	96	581	14.0	20.0
2	朱建伟	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	25	24	2.0	4.0
3	陈浩	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	43	189	8.0	12.0
4	陈俊升	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	6	6	1.0	2.0
5	曹津	上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心	7	1	1.0	1.0