基于单克隆抗体的O型口蹄疫病毒抗体固相竞争ELISA检测方法的建立

• 作者: 于力 刘彦玲 周国辉 李敏杰 许智强
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 单克隆抗体 固相竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 145-149
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3919字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201907025

摘要

为建立评价O型口蹄疫病-毒(FMDV)疫苗免疫水平的方法,本研究以单克隆抗体(MAb)3D9为捕获抗体,以HRP标记的MAb 8E8作为检测MAb,经过条件优化建立了基于MAb的检测O型FMDV抗体的固相竞争ELISA(SPCE)方法.对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验.结果 显示,MAb 3D9的最佳稀释度为1∶25 000,灭活0型FMDV抗原的最佳稀释浓度为1∶3,HRP标记的MAb 8E8的最佳稀释度为1∶5000,当血清1∶32稀释时,检测的临界值确定为45％.该方法分别检测A型FMDV抗体阳性参考血清以及牛冠状病毒、牛轮状病毒以及猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒的标准阳性血清,检测结果均为阴性,未出现交叉反应.经检测,当阳性标准血清的抗体稀释度在1∶512时,该方法仍具有较好的敏感性;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10％,表明其重复性较好.并将该方法与液相阻断ELISA(LPBE)方法和病毒中和试验(VNT)的相关性进行了比较,结果显示该方法与LPBE和VNT的相关性分别为0.896和0.923.本研究为国内评价O型FMDV疫苗免疫水平建立了一种新的方法.