大黄鱼性腺原代细胞培养技术的建立

• 作者: 王志勇 郭一兰
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 大黄鱼 精巢 卵巢 原代细胞培养
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 321-327
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.19715/j.jmuzr.2020.05.01

摘要

为建立大黄鱼精巢和卵巢组织的原代细胞培养技术,获得单层的性腺原代细胞,采用组织块贴壁法,对来源于大黄鱼的卵巢和精巢组织的细胞进行原代培养,并使用0.25％胰酶消化法尝试传代培养.在26℃ 条件下,添加20％胎牛血清,在100 IU/mL青霉素(Penicillin)和100μg/mL硫酸链霉素(Streptomy-cin)的DMEM/F-12(HAM)1:1培养基中培养大黄鱼卵巢和精巢组织的细胞.结果显示:1)大黄鱼卵巢组织在贴壁后第4天成纤维细胞开始迁出,呈辐射状生长;贴壁后第6天迁移出上皮样细胞,呈"铺石路"状生长;贴壁后第17天左右出现不同程度贴壁抑制.2)大黄鱼精巢组织在贴壁后第5天迁出成纤维细胞;第9～17天,部分成纤维细胞呈长梭形涡旋状生长,部分呈三角形均匀分布增殖;贴壁后第18天左右部分细胞空泡化严重.3)在培养后第8天对卵巢和精巢组织原代细胞进行胰酶消化传代培养,传代培养第2天部分细胞贴壁分裂增殖,传代培养3d后可进行第二次传代,第二次传代后细胞长势变缓,细胞空泡化加快.