绵羊IRS1基因CDS区克隆、序列分析及其组织表达研究

• 作者: 刘秀 李少斌 沈继源 王建清 王继卿 罗玉柱 胡江 郝志云
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: IRS1 克隆 绵羊 组织表达
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 动物水产科学
• 页码范围: 522-529
• 页数: 8页
• 分类号: S826.12
• 字数: 5583字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2020060

摘要

[目的]克隆绵羊IRS1基因CDS区,并研究其序列特征和组织表达.[方法]选择健康、3岁、处于第4胎的泌乳高峰期(产后第3周)小尾寒羊和空怀期小尾寒羊母羊各3只作为研究对象,利用克隆测序技术获得绵羊IRS1基因的CDS序列,用生物信息学分析其编码的氨基酸序列特征,用RT-qPCR检测IRS1基因在肝脏、心脏、背最长肌、脾脏、肺脏、卵巢、肾脏和乳腺组织中的表达模式.[结果]绵羊IRS1基因的CDS全长为3708 bp,编码1235个氨基酸,蛋白分子量为130462.80,等电点为8.99,不稳定指数为73.55,预测该蛋白为不稳定、碱性亲水性蛋白.蛋白互作分析表明,绵羊IRS1可以与胰岛素样生长因子1受体(IGFR1)、磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、丝裂原活化蛋白激酶10(MAPK10)和生长因子受体结合蛋白2(GRB2)相互作用,KEGG分析发现IRS1主要参与了PI3K/AKT和MAPK 2个信号通路.RT-qPCR分析表明,IRS1基因在小尾寒羊各组织中均表达,并且表现出明显的组织特异性,它在背最长肌中的表达量最高,其次是肝脏和心脏,在肺脏、肾脏、卵巢和乳腺组织中表达量较低,在脾脏中弱表达.同时,绵羊IRS1基因也表现出明显的时序表达性,在泌乳高峰期小尾寒羊中,IRS1基因在乳腺组织中的表达量是空怀期乳腺组织中表达量的2.77倍(P<0.05).但在除乳腺和脾脏外的其他6个组织中,该基因在空怀期中的表达量均显著高于泌乳高峰期中的表达量(P<0.05).[结论]克隆得到绵羊IRS1基因完整的CDS序列,它全长3708 bp,编码1235个氨基酸.IRS1在小尾寒羊各组织中广泛表达,并且表达出明显的组织特异性和时序特异性.