基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达

• 作者: 吴坚平 周海胜 杨立荣 邓通
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 醇脱氢酶 异源可溶性表达 分子伴侣 NADPH
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 24-32
• 页数: 9页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2005006

摘要

目的:生物催化的氧化还原反应广泛应用于手性化合物的制备,其中很多反应涉及辅酶NADPH的原位再生.以异丙醇为辅助底物,利用醇脱氢酶再生NADPH,具有比酶活高、副产物丙酮易于分离等优势,受到越来越多的关注.选择极具应用潜力的来源于Clostridium beijerinckii的醇脱氢酶CbADH作为研究对象,针对其在大肠杆菌中的可溶性表达差、酶活低的瓶颈问题开展研究.方法:首先通过引入诱导型质粒pGro7表达分子伴侣GroES-GroEL,将pET-28a(+)质粒表达CbADH的可溶性提高了3.57倍,酶活达到出发菌株的4.83倍.其次,考察了另外三种不同的分子伴侣表达策略:pET-28a(+)单质粒共表达、基因组强化表达GroES-GroEL和组成型改造pGro7/GroES-GroEL和pET-28a(+)/CbADH双质粒共表达.结果:组成型改造pGro7和pET-28a(+)双质粒共表达策略的效果最优,其CbADH的可溶性表达提高了8.07倍,酶活达到了21.79U/mg DCW,是出发菌株的9.43倍.结论:为CbADH的工业应用奠定了良好的基础,也为外源蛋白的可溶性表达提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨立荣	浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所	117	903	14.0	25.0
2	吴坚平	浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所	99	759	12.0	23.0
3	邓通	浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0
4	周海胜	浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所	4	6	1.0	2.0