酿酒酵母荧光定位报告菌株的开发

• 作者: 戴益民 杨丽娟 谢宁清 赖芬菊
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 蛋白定位 RedStar 酵母报告菌株 共定位
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 667-678
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20190277

摘要

[目的]为了给外源蛋白在酿酒酵母细胞中的定位提供参考,构建酿酒酵母荧光定位报告菌株.[方法]运用染色体同源重组的方法,将突变的、已进行酵母表达优化的红色荧光蛋白RedStar分别整合到12个酵母细胞器标记蛋白的C端,与之进行融合表达,用特异性引物对每一个酵母荧光定位报告菌株进行PCR扩增和测序验证,用激光共聚焦显微镜进行荧光检测,对线粒体和细胞核进行特异性染料染色,用EGFP标记沙门氏菌已知定位蛋白SipA,与构建的相应荧光定位报告菌株进行共定位.[结果]构建的酿酒酵母荧光定位报告菌株可分别标示酵母细胞的肌动蛋白、晚期胞内体、细胞核、核周质、纺锤体、线粒体、过氧化物酶体、脂滴、初级内吞体、次级内吞体、高尔基体顺面及高尔基体反面.PCR扩增及测序验证、荧光检测、染料与相应报告菌株的共定位、已知定位蛋白SipA与相应报告菌株的共定位均提示报告菌株构建成功.[结论]这些报告菌株的构建,为日后在酵母中观察细胞器动态变化,以及未知蛋白在酵母中的定位提供了基础性工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴益民	江西农业大学动物科学技术学院	39	159	7.0	11.0
2	杨丽娟	江西农业大学生物科学与工程学院	4	25	2.0	4.0
3	赖芬菊	江西农业大学生物科学与工程学院	6	4	1.0	2.0
4	谢宁清	江西农业大学生物科学与工程学院	1	0	0.0	0.0