SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

• 作者: 刘洋 姜广路 孙琦 张宗德 李自慧 潘丽萍 王赛赛 贾红彦
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鸟分枝杆菌 SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线 测序
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 251-257
• 页数: 7页
• 分类号: R446.5
• 字数: 6466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2020.04.04

摘要

目的 基于SYBR Green Ⅰ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法.方法 以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性.结果 SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6× 10-2 ng/μL.200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P＞0.05);两法符合率为99.5％ (199/200),一致性较高(Kappa值＞0.75,P＜0.01);建立方法的敏感性为93.8％(15/16),特异性为100.0％(184/184),阳性预测值为100.0％(15/15),阴性预测值为99.5％(184/185).结论 以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR Green Ⅰ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径.