GoldenBraid酶切连接反应体系的优化

• 作者: 唐克轩 张耀杰 徐美慧 苗志奇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: GoldenBraid 优化 有效克隆 酶切连接效率
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 266-274
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0161

摘要

旨在获得更为高效稳定的GoldenBraid(GB)酶切连接组装反应体系.通过优化GB反应中酶切时间、缓冲体系、限制性内切酶和底物配伍来提高有效克隆的效率,确定最佳反应体系.结果 显示,4 min酶切时间,1μL FastDigest Buffer(10×)缓冲体系,1 mmol/L ATP,0.5μL FastDigest Esp3I或FastDigest Eco31I,元件供体载体与受体载体的摩尔比3:1时,有效克隆比例接近99％,是优化前(BsmBI 8％、BsaI 23％)的4倍以上,此时酶切连接效率接近100％.与原始方案相比,通过体系的优化,可以在更少内切酶用量(原方案为1μL)的情况下,显著提高有效克隆比例,表明本方法能提高GB系统的酶切连接效率和实用性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐克轩	上海交通大学农业与生物学院	38	521	12.0	22.0
2	苗志奇	上海交通大学农业与生物学院	8	24	2.0	4.0
3	徐美慧	上海交通大学农业与生物学院	2	0	0.0	0.0
4	张耀杰	上海交通大学农业与生物学院	1	0	0.0	0.0