优化大肠杆菌CRISPR/Cas9基因编辑系统及应用

• 作者: 张学礼 朱欣娜 路福平 邵梦瑶
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因编辑 大肠杆菌 自剪切功能
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 106-110,114
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2020.04.106

摘要

CRISPR/Cas9基因编辑系统目前已经广泛地应用于大肠杆菌工程菌株的构建,若能构建出一种能连续进行基因编辑的CRISPR/Cas9系统,将极大地提高大肠杆菌工程菌株构建的效率.设计并构建了具有自剪切功能的供体质粒pV4,优化了双质粒CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现了基因的连续敲除或整合.pV4质粒,在原始供体质粒placZ的骨架区域添加3个元件:针对供体质粒上氯霉素基因cat的N20-gRNA序列;Ptrc启动子,用于表达cat-N20-gRNA;lacIq序列,用于表达LacI蛋白调控Ptrc启动子.pV4供体系列质粒(敲除或整合)实现基因编辑后,cat-N20-gRNA在IPTG的诱导表达引导Cas9蛋白对供体质粒进行自剪切,从而方便下一轮基因的编辑.将pV4系列质粒(敲除或整合)应用于产衣康酸工程菌株的构建,连续敲除ptsI、iclR及整合cad基因,基因编辑结果显示,优化后的双质粒CRISPR/Cas9基因编辑系统,能快速消除供体质粒,实现基因的连续敲除或整合,节约了基因操作的时间,有广泛的工程菌株构建应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	路福平	天津科技大学生物工程学院	184	1421	20.0	27.0
2	朱欣娜	中国科学院天津工业生物技术研究所	6	0	0.0	0.0
6	张学礼	中国科学院天津工业生物技术研究所	10	23	3.0	4.0
10	邵梦瑶	天津科技大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0