利用CRISPR/Cas9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用

• 作者: 余深翼 吴宝成 周五朵 朱二鹏 赵金荣 郑玲红
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas 9系统 大肠杆菌 aroA基因 敲除 同源修复
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 762-770
• 页数: 9页
• 分类号: S852.612
• 字数: 5055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.04.016

摘要

旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异.首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5a和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序.CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46％～58％;测序结果进一步证实目的基因敲除成功.本试验成功构建大肠杆菌a roA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴宝成	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	42	507	11.0	22.0
2	周五朵	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	12	15	2.0	3.0
3	赵金荣	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	3	7	1.0	2.0
4	朱二鹏	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	13	8	1.0	2.0
5	余深翼	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	4	8	1.0	2.0
6	郑玲红	福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室	3	7	1.0	2.0