tk1基因敲除Vero细胞株的建立及其在单纯疱疹病毒tk基因修复中的应用

• 作者: 佘明敏 卢锐涛 陈晓湘 雷志翔
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1) 胸苷激酶基因 Vero细胞 基因敲除 基因修复
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 人类病毒研究论著
• 页码范围: 829-833
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003790

摘要

利用单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simp1ex virus type 1,HSV-1)标准株F细菌人工染色体(HSV-BAC)系统构建的HSV重组病毒由于存在tk基因缺陷,无法表达胸苷激酶,影响病毒潜伏/激活,故需对该基因进行修复.为此,本研究建立了tk1基因敲除的Vero细胞株(tk1-Vero),并利用该细胞株建立了次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶脱氧核苷(Hypoxanthine-aminopurine-thymidine,HAT)选择性培养液筛选方法,对经同源重组方式完成tk基因修复的病毒进行筛选.首先,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除Vero细胞tk1基因,通过有限稀释法建立tk1-Vero细胞株,采用DNA测序和Western Blot对tk1-Vero细胞株进行鉴定;比较HSV(F)和tk HSV(F)在tk1-Vero细胞和tk基因缺陷的入骨肉瘤143细胞中的增殖情况;在tk1-Vero细胞中,采用HAT选择性培养液筛选方法,对tk基因修复病毒进行筛选.结果 显示,本研究成功建立了稳定的tk1-Vero细胞株;与143细胞相比,tk1-Vero细胞更适于病毒增殖及tk基因修复病毒的筛选;最后在tk1-Vero细胞中,利用HAT选择性培养液成功筛选出tk基因修复病毒.本研究表明,采用tk1-Vero细胞株建立的HAT选择性培养液筛选方法可以对tk基因修复病毒进行高效快速筛选.