非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

• 作者: 张桂红 李向东 李雪锋 王同燕 王孟月 王衡 田克恭 白晨雨 白露露 赵少若 邓均华 邓跃 郝丽影
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 p62蛋白 单克隆抗体 免疫组化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1074-1082
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 6222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.05.018

摘要

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p62蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化(IHC)检测,本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞.结果 显示:基于纯化的p62蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了18株可稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经IFA检测,制备的单克隆抗体均与非洲猪瘟病毒反应,且不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等猪源常见病毒反应,特异性良好.抗体识别蛋白的鉴定结果显示,3株M Abs识别p35蛋白,15株MAbs识别p15蛋白.14株MAbs重链亚类为IgG1型,4株MAbs重链亚类为IgG2a,轻链均为Jc链.利用18株MAbs对ASFV感染猪的肺、扁桃体、淋巴结等组织进行IHC检测,结果显示5株MAbs均能够与感染ASFV的组织发生特异性的免疫反应.本研究获得的非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体可为非洲猪瘟病毒免疫学检测方法的建立及p62蛋白的结构功能等基础研究提供重要的生物材料.