葡萄霜霉病菌环介导等温扩增检测体系的建立

• 作者: 杜娟 王小利 闫思远 顾沛雯
• 来源期刊: 河南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄霜霉病菌 LAMP 检测引物筛选 反应条件优化 田间检测
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 995-1001
• 页数: 7页
• 分类号: S436
• 语种: 中文

摘要

建立了葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测体系,为葡萄霜霉病的早期诊断和预测预报提供依据.根据葡萄霜霉病菌的rDNA-ITS全长基因序列设计合成了7对引物,建立并优化了葡萄霜霉病菌LAMP反应体系.利用该检测体系对包括P.viticola在内的14种常见植物病原真菌的基因组进行LAMP扩增,验证所建立体系的特异性,并对灵敏性进行评价.使用优化后的检测体系对田间发病叶片的总DNA基因组进行扩增,确认了所建立的检测体系的实用性.通过对比7对引物的特异性,筛选出1对特异性良好的引物.LAMP最佳反应条件为:以PVITFIP-1/PVITBIP-1和PVITF3-1/PVITB3-1为引物,反应体系中Bst DNA聚合酶含量为0.32 U·μL-1,在62℃ 反应60 min可以检出葡萄霜霉病菌DNA,其灵敏度为0.3 ng·μL-1.初步在田间使用该技术,可以检测到葡萄霜霉病菌,说明所建立的体系具有一定的实用性.构建的葡萄霜霉病菌LAMP检测体系高效,特异性强,可以用于检测田间的葡萄霜霉病菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾沛雯		59	312	10.0	13.0
2	闫思远		9	6	2.0	2.0
3	杜娟		12	8	1.0	2.0
4	王小利		1	0	0.0	0.0