绵羊肺炎支原体和山羊伪结核棒状杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 林裕胜 肖义军 胡奇林 黄丽丽
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊肺炎支原体 伪结核棒状杆菌 双重PCR
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 44-50
• 页数: 7页
• 分类号: S 852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2020.01.007

摘要

目的为实现临床上对绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae, Mo）和山羊伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis, CP）两种病原混合感染的同时检测，建立Mo和CP的双重PCR检测方法。方法应用基于Mo的P80基因和CP的PLD基因设计两对特异性引物，对反应体系和条件进行优化，验证方法的特异性、灵敏性和重复性；应用该方法和单一PCR方法对临床收集的70份样品进行检测，比较检测结果。结果建立的Mo和CP的双重PCR检测方法能够同时扩增出Mo 700 bp和CP 290 bp左右的片段，而对其他羊病常见病原的DNA扩增均为阴性。Mo和CP的检测下限分别为1 530 pg·μL−1和3 500 pg·μL−1。该方法具有良好的重复性。临床样品检测结果显示：70份临床样品中Mo阳性率为25.71%，CP阳性率为18.57%，同时感染Mo和CP阳性率为7.14%，与单一PCR检测结果符合率为100%。结论本研究建立的双重PCR检测方法具有特异性强、灵敏性较高、重复性好等特点，为临床上Mo和CP混合感染的快速检测以及流行病学调查提供了实用方法。