利用CRISPR/Cas9技术对鸡AMHR2基因进行精确编辑

• 作者: 张智英 李鹏程 祝梦琦 魏泽辉 黄思嘉
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 基因敲除 AMHR2 鸡
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 12-18
• 页数: 7页
• 分类号: S811.5
• 字数: 4101字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2020.06.003

摘要

为了在鸡基因组上对AMHR2基因进行精确编辑,该研究利用crispr,mit.edu:807网站设计并通过PCR退火拟合获得成对的AMHR2基因靶位点,将靶位点分别整合进pX330-U6-Chimeric_ dBsa I-CBh-hSpCas9载体骨架,构建靶向AMHR2基因的成对CRISPR/Cas9敲除载体.将包含成对靶位点的DNA序列整合进pB-CMV-DsRed-CAG-Chimerie.200 bp repeat.Puro-T2A-GFP载体骨架,构建与敲除载体对应的双荧光报告载体.载体测序鉴定正确后分别共转染HEK293T细胞与鸡DF-1细胞,通过细胞荧光粗略判断CRISPR/Cas9系统是否工作.随后,利用Puromycin对基因编辑阳性的DF-1细胞进行药物筛选富集,提取细胞基因组进行TA克隆,进一步检测CRISPR/Cas9系统的工作效率.结果 表明靶向鸡AMHR2基因的CRISPR/Cas9敲除系统构建成功,且成对靶位点敲除系统的工作效率高于单一靶位点敲除系统,CRISPR/Cas9敲除系统在DF-1细胞基因组上对AMHR2基因的敲除效率约为60.0％,并在鸡DF-1细胞基因组上实现了AMHR2基因的精确编辑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏泽辉	西北农林科技大学动物科技学院	19	52	4.0	5.0
2	张智英	西北农林科技大学动物科技学院	28	36	4.0	4.0
3	李鹏程	西北农林科技大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
4	黄思嘉	西北农林科技大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0
5	祝梦琦	西北农林科技大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0