稳定表达CD19的HeLa细胞株的构建及其作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞功能鉴定

• 作者: 敖罗权 敖翔 郭韡 邢伟 胡雪停 李战 姚孟维 吴晓凤 徐祥
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: CD19 HeLa细胞 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞 慢病毒 实体肿瘤
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1095-1101
• 页数: 7页
• 分类号: S718.85|R392.12
• 语种: 中文

摘要

目的 构建稳定表达CD19的HeLa细胞株并鉴定其作为CD19嵌合抗原受体T(CD19-CAR-T)细胞的靶细胞功能.方法 以NCBI中人CD19基因序列为模板,设计并合成引物,从Raji细胞中扩增CD19;酶切回收CD19片段和慢病毒载体pLVX-IRES-Puro,并行重组反应;重组载体pLVX-CD19-IRES-Puro基因测序;载体质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,收集浓缩慢病毒,稀释计数法测定滴度;慢病毒感染HeLa细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达株,实时定量PCR和流式细胞术检测CD19表达;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养,ELISA检测培养上清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度.结果 插入重组载体中的CD19序列无误;获得滴度为1 × 108转导单位(TU)/mL的CD19过表达慢病毒;在筛选所得的稳定表达株中,CD19的mRNA表达水平和膜蛋白表达水平显著高于对照组HeLa细胞;CD19-CAR-T细胞与CD19-HeLa细胞共培养后,IL-2、IFN-γ以及TNF-α分泌显著增加.结论 稳定表达CD19的HeLa细胞株构建成功,且能作为CD19-CAR-T细胞的靶细胞.