一种可用于溶瘤病毒M1体内组织定量的TaqMan RT-Qpcr检测法的建立与评价

• 作者: 但佳 梁剑开 秦榛 胡骏 蔡静 颜光美
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: TaqMan RT-qPCR 溶瘤病毒M1
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 950-960
• 页数: 11页
• 分类号: R33-33|R363
• 字数: 1072字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2020.05.027

摘要

目的:监测溶瘤病毒M1在组织中的传播情况,以更好地控制给药剂量,确保安全性.方法:建立一种基于TaqMan的实时定量PCR检测法,用于对组织中溶瘤病毒M1的检测和定量,并检测静脉注射病毒后多种实验动物体内的病毒载量和分布.结果:我们以一对特异的引物(Q3)和标准RNA开始SYBR Green RT-qPCR研究.通过优化实验方法发现当退火温度高于62℃时可降低基质效应,但却影响了扩增效率.因此我们建立了一步法TaqMan RT-qPCR实验,重新设计了一对Q3短引物(Q3S).运用一步TaqMan RT-qPCR检测法和Q3S引物,在混有SD大鼠或食蟹猴基质RNA的背景下,均能特异性检测到低拷贝数的标准RNA.经验证,该方法适用于检测M1病毒在小鼠、SD大鼠和食蟹猴体内的组织分布.结论:利用Q3S引物构建的TaqMan一步法RT-qPCR能够定量检测不同动物不同组织样品中的M1病毒,具有特异性和敏感性,可进一步应用于临床样品的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	颜光美	中山大学中山医学院药理学教研室	38	166	7.0	10.0
2	胡骏	中山大学中山医学院药理学教研室	11	222	2.0	11.0
3	秦榛	中山大学中山医学院药理学教研室	1	0	0.0	0.0
4	但佳	中山大学中山医学院药理学教研室	1	0	0.0	0.0
5	梁剑开	中山大学中山医学院药理学教研室	1	0	0.0	0.0
6	蔡静	中山大学中山医学院药理学教研室	1	0	0.0	0.0