Tet1蛋白对HEK293T细胞增殖、周期及凋亡的影响

• 作者: 刘含 周艳华 张鹏 杨红兰 舒莉萍 范安然 莫晶 金皎
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 表观遗传 Tet蛋白 细胞周期 细胞凋亡 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 69-75
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 4058字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2020.06.010

摘要

目的 构建可诱导Tet1CD过表达的稳转细胞系,探究Tet1蛋白对细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法 构建重组质粒pTRE-Tight_Tet1CD_IRES_RFP_RPBSA_M2rtTA_Puro,然后与表达转座酶的"睡美人"质粒通过脂质体法共同转染到HEK 293T细胞,通过嘌呤霉素筛选和多西环素诱导构建诱导表达型的Tet1CD稳转细胞系293T(Tet1CD).通过Western blot检测Tet1蛋白的表达;通过DNA dot blot检测细胞基因组中5hmC的含量,通过流式细胞术检测Tet1CD蛋白对细胞周期和凋亡的影响;通过细胞计数检测Tet1CD蛋白对细胞增殖的影响.结果 成功建立了可诱导Tet1CD过表达的HEK293T细胞系293T(Tet1CD);Western blot结果显示诱导后细胞内Tet1CD蛋白表达上升;DNA dot blot结果显示过表达Tet1CD蛋白细胞内5hmC含量升高;流式细胞术结果显示,Tet1CD过表达促进了细胞凋亡(P<0.05)及增加G2时期细胞比例(P<0.05);细胞计数结果显示,Tet1CD过表达抑制细胞增殖(P<0.0001).结论 Tet1蛋白可能通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期最终抑制细胞增殖.