一种快速定量检测猴组织中SIV/SHIV的方法

• 作者: 姚艳丰 孟凤珍 高歌
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 猴免疫缺陷病毒 猴-人免疫缺陷病毒 TaqMan实时荧光定量PCR 灵敏度
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 103-108
• 页数: 6页
• 分类号: R-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2020.12.016

摘要

目的 以猴-人免疫缺陷病毒(simian-human immunodeficiency virus,SHIV)gag基因为特异性扩增靶标,建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan实时荧光定量PCR法检测猴血浆、外周血单核细胞和淋巴结中的猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)和SHIV.方法 以SHIVSF162p3n gag基因为模板,用普通PCR方法扩增出109 bp DNA片段用于克隆构建标准品质粒pGEM?-T-SHIV gag.通过对SHIV标准品质粒定量分析,优化反应体系,检测TaqMan实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异度和重复性.结果 TaqMan实时荧光定量PCR法能有效地检测出102～107 copies/μL SIV/SHIV gag基因mRNA,线性系数为R2=0.998,slop=-3.304.方法重复性检测显示CV％在0.6％～1.1％之间.结论 该TaqMan实时荧光定量PCR法具有快速、灵敏和特异性高的优点,适用于SIV/SHIV感染猴动物模型的研究工作.