草原红牛Bcl2L13的CDS克隆及其在不同组织的表达规律研究

• 作者: 刘理想 吕阳 吴健 张国梁 秦立红 胡忠昌 薛佳佳 高一
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 草原红牛 Bcl2L13基因 克隆 生物信息学分析 表达差异
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 69-75
• 页数: 7页
• 分类号: S823.2
• 字数: 5020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20190906-07

摘要

本研究旨在初步探究草原红牛Bcl2L13的基因功能,并对其进行生物信息学分析,检测Bcl2L13在草原红牛不同组织中的表达差异.本实验以草原红牛为研究对象,根据GenBank公布的牛Bcl2L13基因序列(GenBank登录号:NM_001078082.2)设计引物,PCR扩增获得Bcl2L13的完整CDS并进行测序,利用分析软件进行序列同源性比对并构建系统进化树;获得对应的氨基酸序列并分析蛋白理化特性及蛋白亚细胞结构、蛋白亲疏水性和磷酸化位点;预测蛋白二级结构并进行蛋白质三级结构模型构建;采用实时荧光定量PCR方法检测Bcl2L13基因在草原红牛各组织中的表达规律.结果显示:草原红牛Bcl2L13基因核苷酸序列与普通牛和牦牛的同源性高(100％和99.3％),与瘤牛和亚洲水牛的同源性较高(91.8％、90.5％);Bcl2L13基因CDS大小为839 bp,编码279个氨基酸,该蛋白质分子式为C1348H2108N348O439S5,分子量为30.374 ku,理论等电点为4.51,蛋白质不稳定指数为77.71,总平均亲水性为-0.250.亚细胞定位分析表明,Bcl2L13蛋白分布在内质网(4.3％)、线粒体(4.3％)、过氧化物酶体(8.7％)、细胞质(65.2％)、细胞骨架(4.3％)、细胞核(13.0％);磷酸化位点分析发现Bcl2L13蛋白存在33个磷酸化位点;二级结构主要形式有α-螺旋(22.4％)、β-转角(12.1％)、β折叠(31.0％)、无规则卷曲(34.5％),与三级结构预测相同;Bcl2L13在背最长肌中表达量最高,在肺组织中表达量最少.综上,Bcl2L13基因在生物进化过程中具有低保守性,其编码的氨基酸组成的蛋白质结构不稳定,属于水溶性蛋白,主要在细胞质中发挥作用,在草原红牛不同组织的表达量有显著差异.