β防御素124沉默通过p38MAPK/AP1通路调控山羊附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达

• 作者: 乔利英 任有蛇 刘文忠 孟繁荣 张春香 董复成 邰苗苗
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 附睾头细胞 β防御素124 shRNA慢病毒载体 p38MAPK/AP1通路 山羊
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 1248-1259
• 页数: 12页
• 分类号: S826.2
• 字数: 7934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.06.009

摘要

旨在研究山羊β防御素124(goat beta-defensin 124,gBD124)沉默对p38MAPK/AP1通路及下游细胞趋化因子和细胞因子表达的影响.本研究将设计的3条gBD124-shRNAs载人LV10-U6/RFP&Puro质粒载体,与包装质粒共转染到293T细胞中,用梯度稀释法测定病毒原液的滴度;将构建的3个LV10-gBD124和LV10-gBD124-NC载体转染到山羊附睾头细胞中,筛选有效沉默载体;然后用有效沉默载体联合转染附睾头细胞,设置了空白细胞对照组、LV10-NC组、有效沉默载体组,用2μg·mL-1嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blot和ELISA检测gBD124、MAPK信号通路关键蛋白、细胞因子及趋化因子基因及蛋白表达情况.本研究构建了gBD124沉默慢病毒载体,筛选出LV10-gBD124-51和LV10-gBD124-161两个有效载体,并成功构建了gBD124沉默稳定转染的附睾头细胞株.与NC对照组相比,gBD124沉默显著降低了山羊附睾头细胞MAPK通路中MAPK1以及AP1的两个亚型c-JUN和PFOS基因表达(P＜0.05),显著增加了RASA1基因表达(P＜0.05);gBD124沉默显著降低了总p38MAPK、总c-JUN和总c-FOS蛋白表达,以及磷酸化p38MAPK和c-JUN蛋白表达(P＜0.05);gBD124沉默显著上调了MAPK通路下游IL-1β及其受体IL-1R2、IL-8和趋化因子CCL6和CCL21基因表达(P＜0.05),下调了CCL5和IL-1α基因表达(P＜0.05);gBD124沉默显著降低了细胞培养液中CCL5浓度(P＜0.05).与空白对照组相比,gBD124沉默显著增加了培养液中IL-1β和IL-8浓度,降低了IL-1α浓度(P＜0.05).gBD124基因沉默通过抑制p38MAPK/AP1信号通路调控附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘文忠	山西农业大学动物科技学院	86	476	11.0	18.0
2	任有蛇	山西农业大学动物科技学院	150	714	13.0	18.0
3	张春香	山西农业大学动物科技学院	137	599	13.0	16.0
4	乔利英	山西农业大学动物科技学院	45	148	6.0	10.0
5	孟繁荣	山西农业大学动物科技学院	4	1	1.0	1.0
6	邰苗苗	山西农业大学动物科技学院	6	8	2.0	2.0
7	董复成	山西农业大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0