基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

• 作者: 孙国平 朱鹏 欧明林 薛雯 马驰宇 龚蔚蔚
• 来源期刊: 实验与检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 石骨症 CRISPR/Cas9技术 CLCN-7基因 基因编辑载体
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 470-472,475
• 页数: 4页
• 分类号: R393|R681
• 字数: 2498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1129.2020.03.015

摘要

目的 为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体.方法 根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养.结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNA-CRISPR-Cas9.结论 基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础.