MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制

• 作者: 王嘉明 程国良 郭丽敏 郭艳娟
• 来源期刊: 中国循证心血管医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 微小RNA-148b-3p 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B 心肌细胞 脂多糖 增殖 凋亡
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 846-850,854
• 页数: 6页
• 分类号: R542.2
• 字数: 4686字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4055.2020.07.18

摘要

目的 探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡.方法 通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组.使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组.同时将正常培养的心肌细胞作为Con组.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量.结果 与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-CDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡.