摘要:
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-518c-5p调控结直肠癌细胞HT-29细胞凋亡的机制.方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测人结直肠癌细胞和人正常结直肠细胞中miR-518c-5p的表达量.通过过表达或敲低miR-518c-5p,检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平.通过TargetScan和荧光素酶报告试验筛选miR-518c-5p的靶标并验证.通过敲低聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)或跨膜蛋白61(TMEM61),检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平.敲低miR-518c-5p和PTBP1或过表达miR-518c-5p和PTBP1,检测结直肠癌细胞HT-29的凋亡水平.采用Student's t检验分析.结果 miR-518c-5p在结直肠癌细胞HCT116 (0.94±0.23),HT29(2.41±0.40),RKO(0.84±0.22),COL0-678(1.04±0.33),C2BBe1(1.45±0.41),GP2d(0.97 ±0.30)中的表达量均低于正常结直肠细胞NCM460[(0.32±0.05)%,F=14.010,P<0.01],差异均有统计学意义.过表达miR-518c-5p[(2.40±0.36)%比(4.14±1.01)%,=2.811,P<0.05],HT-29d的凋亡率显著增加[(0.22±0.07)%比(0.77±0.22)%,t=4.126,P<0.05];敲低miR-518c-5p[(2.51 ±0.70)%比(0.45±0.11)%,t=5.011,P<0.05];HT-29d的凋亡率显著降低[(0.20±0.10)%比(0.10±0.03)%,t=2.970,P<0.05];敲低PTBP1后,HT-29d的凋亡水平上升[(0.23±0.04)%比(0.67±0.03)%,t=15.240,P<0.05];但是,敲低TMEM61后,HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.04)%比(0.26±0.01)%,t=0.840,P>0.05].过表达miR-518c-5p(2.31±0.30比4.02±1.01,t=2.828,P<0.05]和PTBP1后,HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.24±0.08)%比(0.23±0.04)%,t=0.194,P>0.05];敲低miR-518c-5p[(2.40±0.70)%比(0.38±0.09)%,t=4.975,P<0.05]和PTBP1后,发现HT-29d的凋亡水平差异无统计学意义[(0.21±0.07)%比(0.25±0.09)%,t =0.608,P>0.05].结论 miR-518c-5p能够通过靶向PTBP1 mRNA的3'端非编码区(3'UTR)来减少PTBP1的表达,以达到促进结直肠癌细胞HT-29凋亡的目的.