摘要:
目的:探究miR-455-3p通过靶向BMP2对地塞米松(Dex)诱导的软骨细胞自噬性死亡的影响.方法:荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与BMP2靶向关系.从SD大鼠中分离软骨细胞,Dex处理后的软骨细胞转染miR-455-3p mimic或联合转染pcDNA-BMP2,将软骨细胞分为4组:Control组、Dex组、Dex+mimic组和Dex+mimic+BMP2组.RT-PCR检测BMP2、Ki67、PCNA mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,免疫荧光检测LC3含量,Western blotting法检测BMP2、Caspase-3、Caspase-9、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、ATG7蛋白表达水平.结果:miR-455-3p和BMP2存在直接靶向作用关系.与Control组比较,Dex组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclinl、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05).与Dex组比较,Dex+mimic组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclinl、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05).与Dex+mimic组比较,Dex+mimic+BMP2组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著降低,细胞增殖倍数显著升高,LC3含量显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclinl、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05).结论:miR-455-3p通过靶向BMP2调节Dex诱导的软骨细胞自噬性死亡.