miR-133a-3p通过抑制氧化还原因子1抑制肝癌细胞恶性生物学行为

• 作者: 孙志鹏 尹刚 张能维 李天雄 闫巍 阿民布和
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-133a-3p Ref-1 HepG2 增殖 迁移 侵袭
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 1217-1223
• 页数: 7页
• 分类号: R73
• 字数: 5083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.10.013

摘要

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响.方法:收集2017年2月～2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达.免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化.结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低.免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈.结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫巍	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	31	135	5.0	10.0
2	张能维	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	34	184	5.0	13.0
3	阿民布和	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	13	34	4.0	5.0
4	孙志鹏	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	9	20	2.0	4.0
5	尹刚	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	5	10	1.0	3.0
6	李天雄	首都医科大学附属北京世纪坛医院胃肠肝胆肿瘤外科	3	0	0.0	0.0