CRISPR/AsCpf1双切刻系统构建初探

• 作者: 张宁 李和刚 秦怀远 赵金山 辛京京
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/AsCpf1 双切刻系统 特异性 突变体 TYCV PAM
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 174-180
• 页数: 7页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20200106-02

摘要

为了在CRISPR/AsCpf1系统的基础上构建双切刻系统,提高基因编辑特异性,本研究设计并构建Cpf1n(R1226A)、Cpf1-RRA(S542R/K607R/K949A)、Cpf1-RRAA(S542R /K607R /K949A /R1226A)3 个 突变体以及相应的crRNA表达载体,通过特定质粒组合与SSA-DKK2报告质粒共转染绵羊成纤维细胞,通过双荧光素酶检测的方式来验证DNA切割效率.结果显示:针对TTTV PAM的CRISPR/AsCpf1双切刻系统有DNA双链切割活性,但是单个的AsCpf1切口酶的DNA双链切割活性并未完全丧失;AsCpf1-RRA突变体针对TYCV PAM靶标具有一定的DNA双链切割活性;AsCpf1-RRAA突变体没有检测到针对TYCV PAM靶标的DNA双链和单链切割活性,但可能保留了DNA结合能力.本研究结果为后续高效CRISPR/Cpf1双切刻系统的开发与改进提供了重要参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宁		6	3	1.0	1.0
2	赵金山		13	49	3.0	6.0
3	辛京京		1	0	0.0	0.0
4	李和刚		1	0	0.0	0.0
5	秦怀远		1	0	0.0	0.0