人源性促甲状腺激素受体单链抗体Fc融合蛋白的制备及鉴定

• 作者: 吴黎黎 贾健安 邵璇璇 黄保军
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 促甲状腺激素受体抗体 单链抗体 昆虫细胞 重组质粒 重组杆粒
• 年，卷（期）: 2020,（14）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1720-1723
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2835字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.14.012

摘要

目的:构建含有促甲状腺激素受体抗体(TRAb)单链抗体的重组载体pFastBacTM1-ScFv-IgG1Fc,通过Bac-to-Bac表达系统实现单链抗体融合蛋白的高效表达,并检测目的蛋白表达和免疫学活性.方法:TRAb抗体的重链可变区(HV)和轻链可变区(LV)的序列以linker(G4S)连接,构建ScFv;Genbank检索人IgG1Fc序列,SnapGene软件分析上述序列和载体pFastBacTM1,以基因合成方式构建重组质粒pFastBacTM1-ScFv-IgG1Fc;pFastBacTM1-ScFv-IgG1Fc转化感受态大肠杆菌DH10Bac生成重组杆粒,pUC/M13正向和反向引物进行PCR分析确认目的基因的序列;重组杆粒采用Cellfectin?Ⅱ试剂转染昆虫细胞Sf9生成P1病毒储液,继续感染Sf9生成高滴度的P2和P3病毒储液;P3病毒储液感染High FiveTM细胞,收集上清通过SPA-Sepharose CL-4B亲和层析纯化获得较纯的单链抗体融合蛋白,SDS-PAGE鉴定目的蛋白;化学发光和免疫组化检测目的蛋白抗原结合力.结果:PCR扩增得到约3747 bp的基因序列,重组杆粒中目的基因正确插入;目的蛋白位于55 kDa附近且无杂带,纯度较高;目的蛋白浓度为248 U/L,单链抗体融合蛋白的结合力较好.结论:Bac-to-Bac表达系统成功构建并表达了TRAb单链抗体融合蛋白,抗原亲和力良好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄保军	安徽医科大学免疫教研室	19	55	5.0	5.0
2	邵璇璇	中国人民解放军联勤保障部队第901医院检验科	6	51	3.0	6.0
3	吴黎黎	安徽医科大学免疫教研室	1	0	0.0	0.0
4	贾健安	中国人民解放军联勤保障部队第901医院检验科	2	0	0.0	0.0